Frequency and magnitude of intermittent hypoxia modulate endothelial wound healing in a cell culture model of sleep apnea

間歇性低氧的頻率和幅度在睡眠呼吸暫停的細(xì)胞培養(yǎng)模型中調(diào)節(jié)內(nèi)皮傷口愈合

來(lái)源：Journal of Applied Physiology, Volume 123, 2017, Pages 1047-1054

《應(yīng)用生理學(xué)雜志》，第123卷，2017年，頁(yè)碼1047-1054

 

摘要

摘要說(shuō)了間歇性低氧（IH）與阻塞性睡眠呼吸暫停（OSA）的心血管后果相關(guān)，但I(xiàn)H對(duì)內(nèi)皮的影響存在爭(zhēng)議，可能是保護(hù)性的或損害性的。研究使用一種新型實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，在人類(lèi)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)模型中，精確控制IH的頻率和幅度，評(píng)估其對(duì)傷口愈合的影響。發(fā)現(xiàn)IH的頻率和幅度顯著調(diào)節(jié)內(nèi)皮修復(fù)，低頻率IH（0.6 cycles/h）在13-4% O2幅度下加速傷口愈合，而高頻率IH（60 cycles/h）模擬嚴(yán)重OSA時(shí)無(wú)顯著影響，表明IH特性是決定細(xì)胞反應(yīng)的關(guān)鍵因素。

 

研究目的

研究目的是確定IH的頻率和幅度對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)皮傷口愈合的影響，以解決IH在OSA中是保護(hù)性還是損害性的爭(zhēng)議，并驗(yàn)證IH特性（如頻率和氧擺動(dòng)幅度）是否調(diào)節(jié)細(xì)胞行為，從而解釋OSA相關(guān)心血管病變的機(jī)制。

 

研究思路

研究思路是先開(kāi)發(fā)一種基于PDMS氣體可滲透膜的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，允許快速氧擴(kuò)散，從而精確控制細(xì)胞培養(yǎng)的氧濃度變化。人類(lèi)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)在膜上，進(jìn)行傷口愈合實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞暴露于恒定氧濃度（1%、4%、13%、20% O2）或IH模式，包括不同頻率（0.6、6、60 cycles/h）和幅度（13-4% O2或20-1% O2）。使用Unisense氧微傳感器校準(zhǔn)系統(tǒng)，確保氧濃度準(zhǔn)確。傷口愈合在24小時(shí)后通過(guò)顯微鏡成像和ImageJ軟件量化，數(shù)據(jù)歸一化到13% O2對(duì)照組，統(tǒng)計(jì)比較不同條件下的愈合率。

 

測(cè)量的數(shù)據(jù)及研究意義

1 測(cè)量了恒定氧濃度下的傷口閉合指數(shù)，來(lái)自圖3。數(shù)據(jù)是在20% O2、13% O2、4% O2和1% O2下的愈合率，顯示在4% O2下愈合顯著增加（約兩倍于13% O2），而1% O2下愈合低于4% O2。研究意義是表明適度低氧（4% O2）能增強(qiáng)內(nèi)皮修復(fù)，但極度低氧（1% O2）效果減弱，提示氧水平對(duì)細(xì)胞反應(yīng)的非線性影響，強(qiáng)調(diào)在OSA模型中需使用生理相關(guān)氧濃度。

 

2 測(cè)量了IH頻率和幅度下的傷口閉合指數(shù)，來(lái)自圖4。數(shù)據(jù)是不同IH模式下的愈合率，例如在13-4% O2幅度下，0.6 cycles/h頻率加速愈合102%，而20-1% O2幅度下，6 cycles/h和0.6 cycles/h頻率分別減少愈合74%和44%；高頻率IH（60 cycles/h）無(wú)顯著影響。研究意義是證明IH的頻率和幅度共同調(diào)節(jié)傷口愈合，低頻率和適度幅度可能保護(hù)性，而高幅度或不當(dāng)頻率可能損害性，這解釋了OSA研究中IH效果的爭(zhēng)議，并突出精確控制IH參數(shù)的重要性。

 

3 測(cè)量了實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中氧濃度的實(shí)時(shí)變化，來(lái)自圖1B和1C。數(shù)據(jù)是使用Unisense傳感器記錄的氧濃度曲線，顯示系統(tǒng)能快速響應(yīng)（約7秒平衡時(shí)間），準(zhǔn)確呈現(xiàn)不同IH模式。研究意義是驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的可靠性，確保IH條件如設(shè)計(jì)應(yīng)用，為細(xì)胞反應(yīng)提供可信基礎(chǔ)，減少實(shí)驗(yàn)誤差。

 

 

結(jié)論

得出了結(jié)論是IH的頻率和幅度顯著影響內(nèi)皮傷口愈合，低頻率和適度幅度IH可能增強(qiáng)修復(fù)，而高頻率或極端幅度IH可能無(wú)效或損害，表明IH特性是決定OSA中心血管后果的關(guān)鍵因素。研究強(qiáng)調(diào)在體外OSA模型中需精確模擬生理氧條件，以可靠評(píng)估細(xì)胞行為。

 

使用丹麥Unisense電極測(cè)量數(shù)據(jù)的研究意義

使用丹麥Unisense電極測(cè)量出來(lái)的數(shù)據(jù)的研究意義在于提供了實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中氧濃度控制的精確驗(yàn)證，確保IH模式的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。在研究中，Unisense氧微傳感器用于測(cè)量PDMS膜上的氧濃度（如圖1B和1C所示），確認(rèn)系統(tǒng)能快速響應(yīng)氣體變化，平衡時(shí)間約7秒，從而可靠地應(yīng)用不同頻率和幅度的IH模式。這種測(cè)量意義是關(guān)鍵性的，因?yàn)樗藗鹘y(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)中氧擴(kuò)散延遲的局限，保證了IH條件與OSA生理相關(guān)性的匹配，從而使得傷口愈合結(jié)果更具說(shuō)服力。此外，Unisense數(shù)據(jù)幫助區(qū)分了IH參數(shù)的細(xì)微影響，如頻率和幅度對(duì)細(xì)胞反應(yīng)的調(diào)制，為OSA病理機(jī)制研究提供了高質(zhì)量實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。