浮游植物培養

用于投喂無節幼體的Rhodomonas salina，在室溫下在裝滿0.2微米過濾海水的15升塑料袋中培養，添加B1培養基和維生素。培養物在12:12的光暗周期下通氣培養。

其中 w 為上升速率（厘米/秒），g 為重力加速度（980 厘米/秒2），d 為卵直徑（198 微米），μ 為海水動力粘度（0.018 克/厘米·秒），αL 為脂質體積分數，ρL 為脂質密度（0.920 克/立方厘米），ρW 為海水密度，αO 為其他固體物質體積分數，ρO 為其他固體物質密度。ρW 和 ρL 根據 2 月 10 日采集的溫鹽垂直剖面數據計算（詳見 Henriksen 等人 2012 年研究）。通過將脂質體積除以卵體積，計算得出 αL 為 0.15。αO 通過重新排列 Visser 和 Jónasdóttir（1999）論文中的公式 6 進行估算。

無節幼體培養

通過垂直拖網使用200微米網孔的WP2網從250米深處采集成熟的C. hyperboreus雌體。將動物保持冷卻，到達實驗室后，在冰鎮培養皿中分選，并分配到裝有50微米過濾海水的10升帶假網底的桶中。每個桶中培養30只雌體，并放置在2.5°C的溫度控制容器中。每兩天更換三分之一的水，每24小時收集一次卵。在0°C、5°C和10°C下建立了用于呼吸實驗以及碳和脂質分析的無節幼體培養物。將100個卵培養在600毫升聚碳酸酯瓶中，瓶中裝滿GF/F過濾海水。每3天通過反過濾更新三分之二的水，從N3開始，用最小濃度為15微克葉綠素a/升的R. salina投喂它們。

卵孵化

設立了兩個不同的孵化實驗。第一個實驗于2月12日開始。將在2.5°C下24小時內產出的卵收集并培養在組織培養板中，每個孔包含10毫升GF/F過濾表面水和30個卵。培養板在恒溫培養箱中于0°C、2.5°C、5°C、7.5°C和10°C下培養。每6小時檢查并計數卵和無節幼體。由于未知原因，在10°C下培養的卵沒有孵化，因此結果中未呈現。第二個實驗于3月3日開始，使用在五個不同溫度下培養13-16天的雌體在24小時內產出的卵。在每個溫度下，如上所述培養五組50個卵。使用Hoboware溫度記錄儀每15分鐘記錄一次溫度。實際溫度與預期溫度略有不同，但為方便起見，在描述數據時將使用預期溫度。將Belěhrádek函數擬合到數據，該函數將胚胎持續時間與溫度相關聯。

為了模擬卵上升過程中的發育時間，將水柱分為三層，以反映不同的水特性：從270米到152米的溫暖底層，平均溫度為2.8°C；從152米到71米的層，平均溫度為1.4°C；以及從71米到0米的冷層，平均溫度為-1.3°C。然后根據從孵化實驗1獲得的Belhrádek函數計算發育速率。

發育

在5.0±0.6°C下，在有食物和無食物的情況下，跟蹤無節幼體從卵到前五個無節幼體期的發育。將六個2.6升聚碳酸酯瓶裝滿GF/F過濾海水，并向每個瓶中添加794±19個在采集后24小時內產出的C. hyperboreus卵。其中三個瓶中加入R. salina浮游植物培養物，濃度為15微克葉綠素a/升。將瓶子放置在溫度控制容器中的恒溫箱內，處于持續黑暗中，并每天手動旋轉一次。每3天，通過反過濾去除三分之二的水，從每個瓶中隨機分選出10-15個無節幼體，并在4%福爾馬林中固定。將瓶子重新裝滿過濾海水，并添加新的食物。每15分鐘記錄一次溫度。在Olympus-CK倒置顯微鏡下對無節幼體進行分期和測量。記錄無節幼體的三個測量值：頭胸甲長度、從頭胸甲尖端到尾末端的全長以及頭胸甲加尾長的全長。對于N1和N2，僅記錄了第一個全長測量值。平均發育時間定義為50%的無節幼體蛻皮到特定階段的時間，通過Landry和Daase等人描述的反正弦平方根轉換比例數據的線性回歸計算。根據培養開始和結束時的無節幼體豐度，按照Aksnes等人的方法計算每日死亡率。使用從孵化實驗1獲得的Belěhrádek函數，按照Corkett等人描述的方法計算其他溫度下的無節幼體發育時間。

碳和脂質含量

從在5°C下飼養的培養物中采集卵和無節幼體用于碳和脂質測量。在24小時后收集卵，在培養4天后收集N1，在培養12或16天后收集N3。對于碳測量，將卵或無節幼體在0.2微米過濾海水中沖洗并轉移到預燃燒的鋁舟中。收集18-35個卵、15-21個N1、6-15個N3和5-8個N4的樣品，每個階段5-10個重復，每個階段有10個僅含過濾海水的對照。收集了兩種類型的N3樣品，一種在過濾海水中培養12天后，另一種在培養16天后，其中N3已投喂R. salina 4天。樣品在60°C下干燥過夜并冷凍直至分析。使用校準有草酸鹽的紅外氣體分析儀進行測量。脂質測量在沖洗過的卵和動物上進行，將其放在預燃燒的GF/F過濾器上。收集70-115個卵、90-100個N1和90-100個N3的樣品，每個處理三到六個重復，每個處理有五個僅含過濾海水的對照。將樣品放入1毫升2:1的氯仿:甲醇中，并在-20°C下冷凍直至分析。

呼吸作用

在0°C、5°C和10°C下測量N1和N3的呼吸速率，使用帶有Clark型氧微傳感器的封閉呼吸測量儀。將5-10個仔細沖洗過的無節幼體放入一個500微升的小室中，小室裝滿0.2微米過濾海水。小室用一個緊密貼合的玻璃塞封閉，塞子上有一個細長的毛細管孔，防止氧氣擴散，超微呼吸系統在測量過程中通過該孔降低。對于每個實驗，測量六個重復小室和兩個裝滿0.2微米過濾海水的對照。根據溫度不同，測量持續15-48小時。在每次測量之間，用塞子塞住毛細管孔，并計數無節幼體。每兩分鐘記錄一次溫度。與卵孵化一樣，實際溫度與預期溫度略有不同，但描述數據時將使用預期溫度。

能量需求

基于呼吸和脂質測量計算無節幼體的能量需求。由于無節幼體主要含有蠟酯，這是一種非常能量和空間高效的儲存介質，因此假設其代謝基于脂質。C. hyperboreus的蠟酯可提供42.7 J/毫克脂質；因此，無節幼體可用的能量計算為無節幼體的蠟酯含量乘以42.7 J/毫克。通過應用脂質代謝的典型氧熱當量19.6 J/毫升，將呼吸速率轉換為每日能量需求。使用這些數字，理論階段持續時間計算為可用能量除以每日能量需求，理論呼吸速率計算為可用能量除以發育時間。通過應用脂質代謝的典型呼吸商0.72，計算無節幼體的最小碳需求。